???? 取样品液1 L,浓缩至浸膏状,用200 mL甲醇溶解残余物;在搅拌条件下向甲醇溶液中缓慢加入1LpH10.0的NaOH溶液和50 g氯化钠,由于过程中所生成的沉淀非常细微,难以回收完全。因此为了减小误差,以6000 rpm的速度10℃下离心20 min,收集沉淀;用甲醇200 mL溶解沉淀,在搅拌条件下向甲醇溶液中缓慢加入pH2.0的盐酸溶液1 L和50 g氯化钠,离心收集沉淀,沉淀在 << /FONT> 50℃下浓缩干燥得样品。(在羊藿苷前处理工艺中,碱液洗涤法为最优方法,其过程中没有淫羊藿苷的损失,而且碱液洗涤法还具有操作方便,溶剂用量低的优点,可用于羊藿苷的规模生产。)
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称取淫羊藿总黄酮30g,?加甲醇使溶解后加2倍量硅胶拌匀,置水浴上挥干溶剂,置索氏提取器中,先用乙酸乙酸乙酯回流提取得馏分1,再用乙酸乙酯:丙酮(1: l)的混和溶液继续回流提取得馏分2。馏分1经65%乙醇重结晶得化合物V; 馏分2采用制备型高效液相色谱法进行分离,色谱柱:hyPesrliC18 10um 20.0x300mm,流动相为甲醇一乙睛一水(30:20:60),流速:6ml/min,检测波长:27Onm,得到单体化合物I、II、III、IV、,经检验其纯度分别是I 98.4%、II 97.8%、III 98.6%、IV 99.36%、V 99.3%(归一法),可以满足结构确证的要求。
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称取3份100 g淫羊藿,按上述最佳提取工艺提取,提取液适当浓缩后,用乙酸乙酯分3次萃取,合并萃取的乙酸乙酯层并回收,真空干燥,得样品1;提取液浓缩至近干,用 5%碳酸钠溶液加热反复溶解多次,趁热过滤,滤液加盐酸调pH 2,放冷,滤取析出的沉淀,真空干燥,得样品2 ;提取液适当浓缩后,加入醋酸铅溶液,至无沉淀发生为止,抽滤,自滤器上用水冲洗沉淀多次后,将沉淀混悬于70%乙醇中,加硫酸脱铅,过滤,滤液减压浓缩,真空干燥,得样品3。
分离工艺提取,得总黄酮粗品,共做6份。取1份测得总黄酮含量为45.31%,重量2.6751 g。其余几份分别用95%乙醇、85%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯和甲醇50 ml回流提取,进行再次提取纯化。提取3次,每次20 min,浓缩制成干膏,真空干燥,结果见表4。
分离工艺考察表明3种分离方法中以酸碱沉淀法较为理想;提取物经甲醇纯化后总黄酮含量和收率均明显提高,甲醇可作为理想的纯化溶剂。